SiHa人子宫颈鳞癌细胞处理方法

　　细胞名称SiHa（人子宫颈鳞癌细胞）

　　种属人

　　年龄（性别）女；55岁

　　组织来源子宫颈鳞癌

　　生长特性贴壁

　　细胞形态上皮细胞样

　　背景描述SiHa细胞是建自一个日本病人的外科手术的原位组织样品。电镜观察表明，在SiHa细胞连接处有典型的桥粒，在SiHa细胞胞质中有丰富的张力丝。在裸鼠中，SiHa细胞能形成低分化的表皮样癌(Ⅲ级)；SiHa细胞中，癌基因PRB和p53阳性。

　　生长培养基MEM＋10%FBS＋1%P/S

　　培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

　　细胞处理：

　　1）冻存细胞的复苏：

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

　　1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53mMEDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

　　3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

　　3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。