人呼吸道上皮细胞HREC细胞验收注意事项

　　细胞名称：人呼吸道上皮细胞HREC

　　产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2

　　细胞数量：1x10^6；1x10^6

　　保存温度：37℃；-198℃

　　运输方式：常温保温运输；干冰运输

　　安全等级：1

　　用途限制：仅供科研1类

　　培养体系：DMEM高糖培养基+20%FBS+1%三抗

　　培养温度：37℃

　　二氧化碳浓度：5%

　　简介：人呼吸道上皮细胞HREC取自女性供体，上皮样，贴壁培养。

　　注释：倍增时间64h

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　　参考文献

　　1致病菌金黄色葡萄球菌及肺炎链球菌代谢产物及菌体成分对人呼吸道上皮细胞结构与功能的影响张鑫;秦啸峰;黄琼;杨义然;杜晓楠中华临床免疫和变态反应杂志2019-12-30期刊

　　2干扰素-λ1在人类鼻病毒感染后儿童呼吸道上皮细胞中的表达林小娟;钟礼立;谢亚平;邓中平中国当代儿科杂志2019-12-1816:51期刊

　　3鼻窦CT测量在呼吸道上皮腺瘤样错构瘤术前诊断中应用周亚美;杨昕;刘文惠;王鸿丽;郝微微临床军医杂志2019-12-15期刊

　　4基于人呼吸道上皮细胞模型的矽尘毒性机制研究陈尚雅;栗子渊;杨旭;牟英文;李超2019全国呼吸毒理与卫生毒理学术研讨会论文集2019-10-25中国会议

　　5基于人呼吸道上皮细胞模型的矽尘毒性机制研究陈尚雅;栗子渊;杨旭;牟英文;杜忠君中国毒理学会第九次全国毒理学大会论文集2019-09-17中国会议

　　验收细胞注意事项

　　1、收到人呼吸道上皮细胞HREC细胞，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系。

　　2、收到人呼吸道上皮细胞HREC细胞，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止3-5小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理。

　　3、收到人呼吸道上皮细胞HREC细胞后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进口胎牛血清。刚接到细胞，若细胞不多时血清浓度可以加到15％去培养。若细胞迏到80%左右，血清浓度还是在10％。

　　4、收到人呼吸道上皮细胞HREC细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养基吸出，留下5-10ML培养基继续培养：超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心3分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

　　5、将培养瓶置于37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于4℃冰箱，以备不时之需。

　　6、24小时后，细胞形态已恢复并贴满瓶壁，即可传代。（贴壁细胞）将培养瓶里的培养基倒去，加3-5ml（以能覆盖细胞生长面为准）PBS或Hanks’液洗涤后弃去。加0.5-1ml0.25%含EDTA的胰酶消化，消化时间以具体细胞为准，一般1-3分钟，不超过5分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁，见细胞脱落下来，加入3-5ml培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后将溶液吸入离心管内离心，1000rpm/5min。弃上清，视细胞数量决定分瓶数，一般一传二，如细胞量多可一传三，有些细胞不易传得过稀，有些生长较快的细胞则可以多传几瓶，以具体细胞和经验为准。（悬浮细胞）用移液管轻轻吹打瓶壁，直接将溶液吸入离心管离心即可。

　　7、贴壁细胞，悬浮细胞。严格无菌操作。换液时，换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液，37℃，5%CO2培养。

　　特别提醒：原瓶中培养基不宜继续使用，请更换新鲜培养基培养。